Изолацията на вируса е решаващ процес в изследванията на вирусологията, клиничната диагностика и развитието на ваксината. Хладилната центрофуга играе жизненоважна роля в този процес, което позволява отделянето на вирусни частици от други компоненти в проба. Като доставчик на висококачествени хладилни центрофуги, аз съм добре - запознат с процедурите за използване на тези инструменти в изолация на вируса. В този блог ще ви преведа през конкретните стъпки.
1. Подготовка на пробата
Преди да използвате хладилната центрофуга за изолация на вируса, правилната подготовка на пробата е от съществено значение.
Събиране на проби
Първата стъпка е да се съберат съответните проби. Те могат да включват биологични течности като кръв, слюнка или тъканни хомогенати. Например, в случай на респираторни вируси обикновено се използват назофарингеални тампони. При събиране на проби трябва да се спазват строги асептични техники, за да се предотврати замърсяването.
Хомогенизация (ако е необходимо)
Ако пробата е тъкан, може да се наложи да се хомогенизира, за да се освободи частиците на вируса. AСмесител на хомогенизаторможе да се използва за тази цел. Хомогенизацията разгражда тъканната структура и гарантира, че вирусът е равномерно разпределен в суспензията. След хомогенизиране пробата обикновено се филтрира чрез фин мрежест филтър за отстраняване на големи отломки.
Добавяне на буфери
Към пробата се добавят подходящи буфери за поддържане на рН и осмотично баланс. Тези буфери също могат да съдържат протеазни инхибитори, за да предотвратят разграждането на вирусните протеини. Изборът на буфер зависи от вида на вируса, изолиран и последващите методи за анализ.
2. Зареждане на хладилната центрофуга
След като пробата е приготвена, е време да я заредите в хладилната центрофуга.
Избор на десния ротор
Първата стъпка при зареждането на центрофугата е да изберете подходящия ротор. Различните ротори имат различен капацитет и са предназначени за специфични видове проби и изисквания за разделяне. За изолация на вируса може да се използва фиксиран - ъглов ротор или ротор на замахване - кофа. Фиксирани - Ъгълните ротори са по -подходящи за гранулиране на вирусни частици, докато люлеещите се - роторите на кофите са по -добри за центрофугиране на градиент на плътност.
Балансиране на пробите
Балансирането е критична стъпка при използването на центрофуга. Небалансираните товари могат да причинят прекомерна вибрация, да повредят центрофугата и да доведат до неточни резултати. Пробите трябва да се поставят в епруветки със същия размер и да се пълнят до същия обем. Ако е необходимо, за балансиране на товара могат да се използват манекен тръби, пълни с равен обем буфер.
Зареждане на тръбите
Внимателно поставете балансираните тръби в слотовете на ротора. Уверете се, че тръбите са правилно седнали и закрепени. Затегнете капака на ротора, за да предотвратите изтичане по време на центрофугиране.
3. Задаване на параметрите на центрофугирането
Следващата стъпка е да зададете подходящите параметри на центрофугиране на хладилната центрофуга.
Скорост
Скоростта на центрофугиране се определя от размера и плътността на частиците на вируса. Като цяло са необходими по -високи скорости за по -малки вирусни частици. За най -често срещаните вируси се използват скорости от 10 000 до 30 000 революции в минута (оборота в минута). Въпреки това, за много малки вируси или за центрофугиране на градиент на плътност може да са необходими дори по -високи скорости.
Време
Продължителността на центрофугирането също зависи от вируса и метода на разделяне. По -къси времена на центрофугиране се използват за начални етапи на изясняване, докато са необходими по -дълги времена за гранулиране на вирусните частици. Обикновено времето за центрофугиране може да варира от няколко минути до няколко часа.
Температура
Тъй като много вируси са чувствителни към температурата, се използва хладилна центрофуга за поддържане на ниска температура по време на центрофугиране. Температурата обикновено се определя между 2 - 8 ° С, за да се предотврати инактивирането на вируса.
4. Процес на центрофугиране
След като параметрите са зададени, стартирайте процеса на центрофугиране.
Наблюдение на центрофугата
По време на центрофугиране е важно да се следи центрофугата, за да се гарантира, че тя работи гладко. Проверете за всички необичайни шумове или вибрации, които могат да показват небалансирано натоварване или механичен проблем. Повечето съвременни хладилни центрофуги са оборудвани със сензори и аларми за откриване на такива проблеми.
Завършване на центрофугиране
Когато центрофугирането приключи, центрофугата автоматично ще спре. Изчакайте роторът да стигне до пълна спирка, преди да отворите капака на центрофугата. Това е важно, за да се предотврати разливане или увреждане на пробите.
5. Пост - Центрофугиране на работа
След центрофугиране, пробите трябва да бъдат внимателно обработени, за да се получи изолираният вирус.
Разделяне на супернатантата и пелетата
Ако целта на центрофугирането е била да се народи частиците на вируса, внимателно отстранете супернатантата от тръбата с помощта на a5000ul микропипета. Супернатантата съдържа разтворимите компоненти и отломки, докато пелетата в долната част на тръбата съдържа частиците на вируса.
Ресуспендиране на пелетата
След това вирусът пелетата се ресуспендира в малък обем буфер. Тази стъпка изисква нежно пипетиране, за да се избегне увреждането на частиците на вируса. Ресуспендираният вирус може да бъде допълнително пречистен или анализиран.
Контрол на качеството
Важно е да се извърши контрол на качеството на изолирания вирус. Това може да включва измерване на вирусния титър с помощта на техники като тестове на плака или количествена полимеразна верижна реакция (QPCR). AАнализатор на влага за хранаможе да се използва и за осигуряване на правилното съдържание на влага в пробите по време на съхранение.
6. Съхранение на изолирания вирус
Правилното съхранение на изолирания вирус е от решаващо значение за поддържането на неговата жизнеспособност.
Замразяване на вируса
Изолираният вирус обикновено се замразява при ултра - ниски температури, като - 80 ° С или в течен азот. Замразяването помага за запазването на вируса за дългосрочно съхранение. Важно е обаче да добавите криопротектанти към вирусната суспензия, за да се предотврати увреждане по време на процеса на замръзване.
Етикетиране и документация
Всяка проба от вируса трябва да бъде правилно обозначена с информация като името на извадката, датата на изолация и вируса. Документацията на процеса на изолиране, включително параметрите на центрофугирането и резултатите от контрола на качеството, също е от съществено значение за бъдещата справка.
Заключение
Използването на хладилна центрофуга в изолацията на вируса включва серия от добре дефинирани стъпки, от подготовка на пробата до след - центрофугиране и съхранение. Като доставчик на хладилни центрофуги, ние разбираме важността на предоставянето на висококачествени инструменти, които могат да отговарят на специфичните изисквания за изолация на вируса. Нашите центрофуги са проектирани с усъвършенствани функции като прецизен контрол на температурата, възможности за висока скорост и удобни за потребителя интерфейси, за да се осигури точна и ефективна изолация на вируса.
Ако участвате в изследване на изолацията на вируси или диагностична работа и търсите надеждна хладилна центрофуга, ще се радваме да ви помогнем. Екипът ни от експерти може да ви предостави подробна информация за нашите продукти и да ви помогне да изберете правилната центрофуга за вашите нужди. Свържете се с нас днес, за да започнете дискусия за възлагане на обществени поръчки и да изведете работата си по изолация на вируса на следващото ниво.
ЛИТЕРАТУРА
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2002). Молекулярна биология на клетката. Garland Science.
- Mahy, BWJ, & Van Regenmortel, MHV (ред.). (2009). Енциклопедия на бюрото на общата вирусология. Академична преса.
- Murphy, FA, Fauquet, CM, Bishop, DHL, Ghabrial, SA, Jarvis, AW, Martelli, GP, ... & Zerbini, FM (2012). Вирусна таксономия: Девети доклад на Международния комитет по таксономия на вирусите. Elsevier.